抗体验证策略:独立抗体验证(Independent antibody strategies)

 

国际抗体验证工作组(IWGAV)于 2016 年 9 月份出台了一套抗体验证指南并发表在《Nature Methods》杂志上, 题为「A Proposal for Validation of Antibodies」, 强调了抗体验证需要针对应用和背景来开展。文章提出了五大“支柱策略”指导抗体特异性验证,即基因策略、正交策略、独立抗体策略、表达标记蛋白、免疫捕获&MS。

 

独立抗体策略是其中一种,即利用两种靶向同一蛋白靶标的独立抗体,可作为检测抗体特异性的有用工具。理想情境下,所用的两种或多种抗体靶向抗原的不重叠表位。通过获取识别同一靶标蛋白的独立区域的抗体结果,可提高抗体具有特异性、适于检测预定靶标结论的可信度。

 

以下实例展示了使用独立抗体验证靶向特异性的操作方法。

我们采用三种独立的NF-kappaB p65 Antibody(ab4,ab5,ab6)分析来自大鼠脑组织,小鼠脑组织,293细胞的提取物的P65表达。三种抗体的免疫原来自人的NF-kappaB p65蛋白的不同表位。种属反应性以及质谱分析结果的差异,表明这些抗体具有明显差异的靶标结合曲线,适于进行特异性确认。对比wb结果表明ab4在三种样本中均检测出条带,ab5在人、大鼠中检测到较弱条带,ab6在293中检测到条带。3种抗体在不同样本中分别表现出相似的条带区域,且条带位置与预测一致,印证了该抗体能够特异性识别P65蛋白。因ab4在三种样本中都检测到明显主带,因此我们选择ab4作为最优的p65抗体。对应产品:NF-kappaB p65 Antibody,货号:AF5006。




 

 

 

种抗体在检测人、小鼠和大鼠p65蛋白时表现出了良好的相关性。

 

通过独立抗体验证的 Affinity 抗体在搜索结果及相关产品页面上会显示独立抗体验证标识

 

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